ELISA新手*一開始了解的就是其原理，大家都知道這一實(shí)驗(yàn)常用的固相酶免疫測(cè)定方法。由于ELISA方法靈敏，特異性強(qiáng)不需要特殊設(shè)備，所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。實(shí)驗(yàn)并非可能一次便成功，那么為何elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)會(huì)失敗呢？ ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在臨床檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常可見到一些錯(cuò)誤結(jié)果（即假陽性或假陰性）如標(biāo)本的影響，對(duì)這一方面上海恒遠(yuǎn)生物來為大家細(xì)細(xì)解讀：
1. 溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測(cè)易產(chǎn)生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)（紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素），在洗滌過程中往往難以完全洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧（O），從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，產(chǎn)生假陽性。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。
2. 標(biāo)本受細(xì)菌污染。因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。
3. 標(biāo)本保存不當(dāng)。在冰箱中保存過久的標(biāo)本，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過深、造成假陽性；為克服上述干擾，ELISA試劑盒測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測(cè)定，5 d內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測(cè)定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。 塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。使用真空采血管；并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值，EDTA、酶抑制劑可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。
標(biāo)本凝固不全。 在工作中，有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
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